La présente invention concerne une méthode de séparation de la bétaïne à partir de solutions issues de procédés de fermentation, de la vinasse et d'autres solutions à base de betterave sucrière, sur une résine échangeuse de cations faiblement acide sous forme H SU+ /SU, dans le cadre d'un procédé de séparation chromatographique. La présente invention concerne également l'utilisation d'une résine échangeuse de cations faiblement acide sous forme H SU+ /SU pour la séparation chromatographique de la bétaïne.