Cette invention concerne un procédé de production d'éthanol à partir d'une matière végétale qui consiste à soumettre la matière végétale à un traitement enzymatique au moyen d'un mélange d'enzymes capables de saccharifier ladite matière végétale et de transformer les sucres ainsi produits en éthanol. Les enzymes utilisées incluent des enzymes capables d'opérer une dégradation de la cellulose, de l'hémicellulose et des amidons. Cette transformation en éthanol des sucres produits au cours de l'étape de saccharification a lieu en présence d'un mélange de levures sélectionnées dans les genres constitués de Candida, Kluyveromyces, Pischia et Saccharomyces. La totalité du processus se déroule à l'intérieur d'une cuve à réaction unique et nécessite généralement moins de trois heures pour transformer la matière brute (paille non traitée, grains, etc.) en un produit d'éthanol distillé. On peut augmenter la production d'éthanol en ajoutant une solution de glucose enrichie au mélange réactif.