Procédé permettant de produire de manière efficace et économique un nucléoside-5'-phosphate, consistant à traiter un nucléoside et un donneur d'acide phosphorique choisi dans le groupe constitué par un acide polyphosphorique (sels), un acide phénylphosphorique (sels) et un acide carbamylphosphorique (sels) avec une phosphatase acide, en particulier avec une phosphatase présentant une diminution de l'activité de nucléotidase, à une valeur de pH comprise entre 3 et 5,5 pour former un nucléoside-5'-phosphate, et à reprendre celui-ci.